1、PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
2、PCR反应过程是：变性→复性→延伸
| 过程 | 说明 | 图解 |
| 变性 | 当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链 |  |
| 复性 | 温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 |  |
| 延伸 | 72℃左右时，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新链由5'端向3'端延伸 |  |
3、结果：上述三步反应完成后，一个DNA分子就变成了两个DNA分子，随着重复次数的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。
细胞被DNA复制与PCR技术的比较：
| 细胞内DNA复制 | 体外DNA扩增（PCR） | ||
| 不同点 | 解旋 | 在解旋酶作用下边解旋边复制 | 80～100℃高温解旋，双链完全分开 |
| 酶 | DNA解旋酶、DNA聚合酶 | TaqDNA聚合酶 | |
| 引物 | RNA | DNA、RNA | |
| 温度 | 体内温和条件 | 高温 | |
| 相同点 | ①需提供DNA模板 ②四种脱氧核苷酸为原料 ③子链延伸的方向都是从5'端到3'端 | ||
知识点拨：
1、DNA分子复制的人工控制
解开螺旋：在80～100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。
恢复螺旋：在50～60℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。
复制条件：缓冲液，DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、两种引物。
控制仪器：PCR仪（温度周期性自动调节仪）。
2、PCR的含义是多聚酶链式反应。
3、PCR技术反应的条件：①稳定的缓冲溶液环境；②DNA模板；③合成引物；④四种脱氧核甘酸；⑤DNA聚合酶；⑥温控设备
4、PCR技术最突出的优点是快速、高效、灵活、易于操作。
5、TaqDNA聚合酶的特点是：耐高温。
知识拓展：
1、DNA含量的测定??分光光度法
| 项目 | 说明 | |
| 原理 | DNA在260nm的紫外线波段有一强烈吸收峰，峰值大小与DNA的含量是正相关 | |
| 过程 | 稀释 | 2μLPCR反应液，加入98μL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释 |
| 对照调零 | 以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的赌注调节至零 | |
| 测量 | 取DNA稀释液100μL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值 | |
| 计算 | DNA含量（μg/mL）=50×（260nm的读数）×稀释倍数 | |
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